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PUREfrex®1.0無細(xì)胞蛋白合成試劑盒組分及使用方法

更新時(shí)間：2025-04-28 點(diǎn)擊次數(shù)：622次

PUREfrex®1.0于2011年推出，是基于PURE system開發(fā)的無細(xì)胞蛋白合成試劑盒，由轉(zhuǎn)錄、翻譯、能量再生所需的蛋白和核糖體組成。

PUREfrex®使用流程.png

圖2.PUREfrex®使用流程

PUREfrex®1.0使用方法（僅供參考）：

以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對(duì)應(yīng)試劑。

1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解，然后在冰上冷卻。

2. 在冰上融化溶液II和溶液III。

3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡(jiǎn)短離心收集管底內(nèi)容物。

4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。

Water	8-X μL
Solution I	10μL
Solution II	1μL
Solution III	1μL
Template DNA	X μL
總體積	20ul

5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。

6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí)，請(qǐng)用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。

試劑盒組分1.0.png

試劑盒組分：

組分名稱	組分內(nèi)容	保存溫度
Solution I	Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.	-20℃
Solution II	Proteins in 30 % glycerol buffer	-20℃/-80℃
Solution III	Ribosome (20 μM)	-80℃
DHFR DNA	PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL)	-20℃

請(qǐng)注意：1.在打開試劑盒之前請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
GFK-PF001-0.25-EX	PUREfrex®1.0	1 x 250 µl
GFK-PF001-2ML-EX		2 ml
GFK-PF001-10ML-EX		5 x 2 ml

除了以上目錄產(chǎn)品外，Cosmo Bio也能根據(jù)客戶的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公開的，您可以根據(jù)PUREfrex®1.0設(shè)計(jì)定制試劑盒。

PUREfrex®1.0組分

PUREfrex®1.0 Solution I (Buffer, Salts, Substrates)組分

Hepes-KOH pH 7.6

Potassium glutamate

Magnesium acetate

Spermidine

Dithiothreitol

10-Formyl-tetrahydrofolate

4 NTPs

20 Amino acids

Creatine phoshate

tRNA mixture

PUREfrex®1.0 Solution II (Proteins)組分

20 Aminoacyl-tRNA synthetases (ARS)

Methionyl-tRNA transformylase (MTF)

3 Initiation factors (IF1, IF2, IF3)

3 Elongation factors (EF-Tu, EF-Ts, EF-G)

3 Release factors (RF1, RF2, RF3)

Ribosome recycling factor (RRF)

T7 RNA polymerase

Nucleoside diphosphate kinase (NDK)

Adenylate kinase (ADK, myokinase)

Ceatine kinase (CK)

Pyrophosphatase (PPiase)

PUREfrex®1.0 Solution III組分

Ribosome

定制應(yīng)用舉例

（-）RF1	用于通過如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)。
（-）T7 RNA polymerase	可用于檢測(cè)其他RNA聚合酶性能，如大腸桿菌RNA聚合酶。
（-）特異性氨基酸和（或）20種氨酰tRNA合成酶	用于合成含非天然氨基酸或少于20個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。

琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖.png

圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖

當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí)，只需向PUREfrex®1.0中添加補(bǔ)充試劑即可。

分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)

產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
GFK-PF003-0.5-EX	DnaK Mix	500 µl Equivalents
GFK-PF003-10ML-EX	DnaK Mix	5 x 2 ml Equivalents
GFK-PF004-0.5-EX	GroE Mix	500 µl Equivalents
GFK-PF004-10ML-EX	GroE Mix	5 x 2 ml Equivalents

幫助形成二硫鍵的添加物

產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
GFK-PF005-0.5-EX	DsbC Set	500 µl Equivalents
GFK-PF005-10ML-EX	DsbC Set	5 x 2 ml Equivalents
GFK-PF006-0.5-EX	PDI Set	500 µl Equivalents
GFK-PF006-10ML-EX	PDI Set	5 x 2 ml Equivalents

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